Aplicación
Buffers para proteómica
Buffers, agentes reductores, detergentes y agentes caótropos para lisis, reducción, desnaturación y resolución.
Los flujos de trabajo de proteómica dependen de tampones (Tris, HEPES, fosfato), agentes reductores (DTT, TCEP), detergentes (SDS, Triton X-100) y agentes chaotrópicos (urea, cloruro de guanidina) para lisar células, mantener las proteínas solubles, romper los puentes disulfuro y separarlas en geles o columnas. Molekula suministra estos reactivos en cantidades para investigación y en gran escala, con trazabilidad ISO 9001:2015 y fichas de seguridad (SDS) disponibles en cinco idiomas.
¿Qué contiene este flujo de trabajo
- Lisis y extracción
- Tris-HCl, HEPES, fosfato sódico, NaCl, EDTA, cocktails inhibidores de proteasas.
- Reducción
- DTT (ditiotreitol) y TCEP rompen de forma limpia los enlaces disulfuro de las proteínas. Se prefiere TCEP para espectrometría de masas porque no reacciona con yodoacetamida.
- Desnaturalización
- SDS para desnaturalización completa; urea y cloruro de guanidina cuando se requiera desdoblar el plegamiento nativo de forma reversible.
- Detergentes
- Tritón X-100, NP-40, CHAPS, desoxicólico sódico, n-dodecil β-D-maltósido.
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Preguntas frecuentes
¿Qué agente reductor debo utilizar, DTT o TCEP?
TCEP es más estable a pH neutro y ligeramente ácido y no interfiere con la alquilación de cisteína en flujos de trabajo de espectrometría de masas. DTT es más económico y funciona bien en reacciones breves a pH 7,5–9. Utilice TCEP para la preparación de muestras de MS, DTT para el tampón de muestra de SDS-PAGE.
¿Cuál es el rango de pH del tampón que funciona para la mayoría de las proteínas?
La mayoría de las reacciones de bioquímica se llevan a cabo a un pH entre 7,4 y 8,0 utilizando Tris o HEPES. Elige un tampón cuyo pKa esté dentro de ±1 unidad respecto al pH objetivo (pKa de Tris: 8,1; pKa de HEPES: 7,5; pKa de fosfato: 7,2).
¿Cómo evito la oxidación de cisteínas?
Mantenga 1–10 mM de DTT o 1 mM de TCEP en su tampón, trabaje a pH más bajo si es posible y desgasee con nitrógeno para proteínas sensibles.
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