Application
Bouffes pour protéomique
Buffers, agents réducteurs, détergents et chaotropes pour la lyse, la réduction, la dénaturation et la résolution.
Les protéomes nécessitent des tampons (Tris, HEPES, phosphate), des agents réducteurs (DTT, TCEP), des détergents (SDS, Triton X-100) et des chaotropes (urée, chlorure de guanidinium) pour lyser les cellules, maintenir les protéines en solution, casser les ponts disulfure, puis les séparer sur gel ou colonne. Molekula fournit ces réactifs en quantités de recherche et en grande quantité, avec traçabilité ISO 9001:2015 et fiche de données de sécurité (SDS) disponibles en cinq langues.
Qu'y a-t-il dans ce workflow
- Lyse et extraction
- Tris-HCl, HEPES, phosphate de sodium, NaCl, EDTA, cocktails d'inhibiteurs protéases.
- Réduction
- DTT (dithiothreitol) et TCEP coupent efficacement les liaisons disulfure des protéines. Le TCEP est préféré en spectrométrie de masse car il ne réagit pas avec l'iodoacétamide.
- Dénaturation
- SDS pour dénaturation complète ; urée et chlorure de guanidinium lorsque le repliement natif doit être dénaturé de façon réversible.
- Détérgeants
- Triton X-100, NP-40, CHAPS, désoxycholate de sodium, n-dodécy-β-D-maltoside.
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FAQ
Quel agent réducteur dois-je utiliser, DTT ou TCEP ?
TCEP est plus stable à pH neutre et légèrement acide et ne perturbe pas l'alkylation de la cystéine dans les workflows de spectrométrie de masse. DTT est moins coûteux et convient bien aux réactions courtes à pH 7,5–9. Utilisez TCEP pour la préparation d'échantillons MS, DTT pour le tampon d'échantillon SDS-PAGE.
Quelle plage de pH de tampon convient à la plupart des protéines ?
La plupart des applications en biochimie s'effectuent à un pH compris entre 7,4 et 8,0, en utilisant des tampons Tris ou HEPES. Choisissez un tampon dont le pKa se situe à ±1 unité de votre pH cible (pKa du Tris : 8,1, pKa de l'HEPES : 7,5, pKa du phosphate : 7,2).
Comment empêcher l'oxydation des cystéines ?
Conserve 1–10 mM DTT ou 1 mM TCEP dans votre tampon, travaillez à un pH plus faible si possible, et dégazez avec de l'azote pour les protéines sensibles.
Besoin d'une qualité ou d'un format de conditionnement personnalisés ?
Parlez à un chimiste — nous menons la chimie de procédé de quelques grammes à des campagnes de plusieurs kilogrammes.
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