Applicazione
Buffer per proteomica
Buffer, agenti riducenti, detergenti e chaotropi per lisi, riduzione, denaturazione e risoluzione.
I flussi di lavoro in proteomica si basano su buffer (Tris, HEPES, fosfato), agenti riducenti (DTT, TCEP), detergenti (SDS, Triton X-100) e agenti chaotropi (urea, cloruro di guanidina) per lisi cellulare, mantenere le proteine solubili, rompere i legami disolfuro e risolverle su gel o colonne. Molekula fornisce questi reagenti in quantità da ricerca e in grandi quantitativi, con tracciabilità ISO 9001:2015 e schede di sicurezza (SDS) disponibili in cinque lingue.
Cosa è incluso in questo flusso di lavoro
- Lisi e estrazione
- Tris-HCl, HEPES, fosfato di sodio, NaCl, EDTA, cocktail inibitori proteasi.
- Riduzione
- DTT (dithiothreitol) e TCEP scindono in modo pulito i legami disolfuro delle proteine. Il TCEP è preferito per la spettrometria di massa poiché non reagisce con l'iodoacetammide.
- Denaturazione
- SDS per denaturazione completa; urea e cloruro di guanidina quando è necessario scomporre in modo reversibile la piegatura nativa.
- Detersivi
- Tritone X-100, NP-40, CHAPS, deossicolato di sodio, n-dodecill β-D-maltoside
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FAQ
Quale agente riducente devo utilizzare, DTT o TCEP?
TCEP è più stabile a pH neutro e leggermente acido e non interferisce con l’alchilazione della cisteina nei flussi di lavoro di spettrometria di massa. DTT è più economico e funziona bene per reazioni brevi a pH 7,5–9. Usare TCEP per la preparazione dei campioni MS, DTT per il buffer del campione in SDS-PAGE.
Qual è l'intervallo di pH del tampone adatto per la maggior parte delle proteine?
La maggior parte delle reazioni in biochimica avviene a pH 7,4–8,0 utilizzando buffer Tris o HEPES. Scegli un buffer il cui pKa sia entro ±1 unità dal pH target (pKa Tris 8,1, pKa HEPES 7,5, pKa fosfato 7,2).
Come posso prevenire l'ossidazione dei cisteini?
Mantenere 1–10 mM DTT o 1 mM TCEP nel buffer, lavorare a pH più basso se possibile e degasare con azoto per proteine sensibili.
Occorrente un grado o un formato personalizzato?
Parla con un chimico: gestiamo chimica dei processi da grammi fino a campagne di diversi chilogrammi.
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