Anwendung
Proteomik-Puffer
Puffer, Reduktionsmittel, Detergenzien und Chaotrope für Lyse, Reduktion, Denaturierung und Auflösung
Proteomics workflows depend on buffers (Tris, HEPES, phosphate), reducing agents (DTT, TCEP), detergents (SDS, Triton X-100), and chaotropes (urea, guanidine HCl) for cell lysis, maintaining protein solubility, breaking disulfide bonds, and enabling separation on gels or columns. Molekula provides these reagents in research and bulk quantities, with ISO 9001:2015 traceability and SDS available in five languages.
Was enthält dieses Workflow
- Lyse und Extraktion
- Tris-HCl, HEPES, Natriumphosphat, NaCl, EDTA, Proteaseinhibitor-Komponenten.
- Reduktion
- DTT (Dithiothreitol) und TCEP spalten sauber disulfidische Brücken in Proteinen. TCEP wird für die Massenspektrometrie bevorzugt, da es nicht mit Iodoacetamid reagiert.
- Denaturierung
- SDS zur vollständigen Denaturierung; Harnstoff und Guanidin-HCl, wenn die native Faltung reversibel aufgebrochen werden soll.
- Tenside
- Triton X-100, NP-40, CHAPS, Natriumdeoxycholat, n-Dodecyl-β-D-maltosid
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Häufig gestellte Fragen
Welches Reduktionsmittel sollte ich verwenden, DTT oder TCEP?
TCEP ist bei neutralem und leicht saurem pH stabiler und stört die Cystein-Alkylierung in Massenspektrometrie-Workflows nicht. DTT ist günstiger und eignet sich gut für kurze Reaktionen bei pH 7,5–9. TCEP für MS-Probenpräparation, DTT für SDS-PAGE-Probenpuffer verwenden.
Welcher Puffer-PH-Bereich eignet sich für die meisten Proteine?
Die meisten Biochemie-Experimente werden bei pH 7,4–8,0 mit Tris oder HEPES durchgeführt. Wählen Sie einen Puffer, dessen pKa innerhalb ±1 Einheit Ihres Ziel-pH liegt (Tris pKa 8,1, HEPES pKa 7,5, Phosphat pKa 7,2).
Wie verhindere ich die Oxidation von Cysteinen?
Halten Sie 1–10 mM DTT oder 1 mM TCEP in Ihrem Puffer, arbeiten Sie bei möglichst niedrigem pH und entgasen Sie mit Stickstoff für empfindliche Proteine.
Benötigen Sie eine individuelle Qualität oder Verpackungsgröße?
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