qPCR
La qPCR (réaction en chaîne par polymérase quantitative) est une technique de biologie moléculaire permettant de quantifier l'ADN ou l'ARN en temps réel pendant l'amplification. Elle est largement utilisée en recherche, diagnostic et contrôle qualité.
Qu'est-ce que la qPCR ?
La qPCR, ou PCR quantitative, est une méthode avancée de détection et de quantification de l'ADN ou de l'ARN cible. Contrairement à la PCR classique, elle permet de mesurer la quantité de cible à chaque cycle d'amplification grâce à des sondes fluorescentes ou des intercalants. Cette approche en temps réel offre une grande sensibilité, une large dynamique de détection et une meilleure reproductibilité.
Comment fonctionne la qPCR ?
La qPCR repose sur l'amplification ciblée de séquences d'ADN ou d'ARN via des amorces spécifiques. À chaque cycle, la fluorescence émise par des sondes (comme les sondes TaqMan) ou des intercalants (comme le SYBR Green) augmente proportionnellement à la quantité d'ADN amplifié. Un appareil détecte cette fluorescence en continu, permettant de déterminer le cycle de seuil (Ct), qui est inversement proportionnel à la quantité initiale de cible.
Quels sont les domaines d'application de la qPCR ?
La qPCR est utilisée dans de nombreux domaines : détection de pathogènes, analyse de l'expression génique, contrôle de la qualité des médicaments, évaluation de la charge virale, et recherche en génomique. Elle est reconnue par les normes ISO, USP, EP et est intégrée dans les protocoles réglementaires (REACH, TSCA) pour les tests de sécurité et de conformité.
Concepts associés
La qPCR est souvent combinée avec la RT-qPCR (réaction en chaîne par polymérase inverse quantitative) pour analyser l'ARN. Elle s'appuie sur des outils analytiques comme l'analyse de données par logiciel (ex. : Bio-Rad CFX, Applied Biosystems QuantStudio) et des standards de référence (CoA, SDS, NMR, HPLC) pour garantir la fiabilité des résultats.