qPCR

Was ist qPCR?

qPCR (quantitative Polymerase-Kettenreaktion) ist eine Weiterentwicklung der klassischen PCR, die es ermöglicht, die Menge an DNA oder RNA in einer Probe in Echtzeit zu messen. Während die herkömmliche PCR nur qualitativ oder semi-quantitativ ist, liefert qPCR eine genaue, quantitative Auswertung durch die Messung der Fluoreszenz während jeder Amplifikationszyklus. Dies ermöglicht präzise Bestimmungen von Genexpression, Viruslasten, Genotypisierung oder mikrobieller Kontamination.

Wie funktioniert qPCR?

Bei qPCR wird eine fluoreszierende Markierung (z. B. TaqMan-Probe oder interkaliertes Farbstoff wie SYBR Green) verwendet, die mit der amplifizierten DNA reagiert. Die Fluoreszenz steigt proportional zur Menge der amplifizierten DNA an. Die Detektion erfolgt in Echtzeit durch ein spezielles Gerät, das die Fluoreszenzintensität nach jedem Zyklus misst. Die Cq-Werte (Cycle quantification) werden zur Berechnung der Ausgangskonzentration herangezogen. Die Methode erfordert sorgfältige Validierung, einschließlich Kontrollen für Nicht-Target-Amplifikation und Effizienzbestimmung.

Welche Anwendungen hat qPCR?

qPCR wird in der klinischen Diagnostik, Forschung, Umweltanalytik und Lebensmittelkontrolle eingesetzt. Beispiele sind die Detektion von pathogenen Mikroorganismen, die Quantifizierung von Genexpression in therapeutischen Studien oder die Überwachung von Genom-Editierungs-Ergebnissen. Die Methode ist hoch empfindlich und spezifisch, vorausgesetzt, die Reagenzien und Protokolle sind validiert.

Verwandte Konzepte

qPCR ist eng verwandt mit digitaler PCR (dPCR), die eine absolute Quantifizierung ohne Standardkurve ermöglicht. Auch die Reverse Transkriptase-qPCR (RT-qPCR) ist eine häufige Variante zur Quantifizierung von RNA.