Espectrofotometría
Técnica analítica que mide la cantidad de luz absorbida o transmitida por una sustancia en función de la longitud de onda, utilizada para determinar la concentración de compuestos en soluciones.
¿Qué es la espectrofotometría?
La espectrofotometría es una técnica fundamental en química, biología y biotecnología que permite cuantificar la concentración de sustancias en solución mediante la medición de la absorción de luz en diferentes longitudes de onda. Se basa en la ley de Beer-Lambert, que establece que la absorbancia es directamente proporcional a la concentración del analito y al camino óptico. Esta técnica se aplica ampliamente en el análisis de proteínas, ácidos nucleicos, fármacos y otros compuestos en laboratorios de investigación, control de calidad y desarrollo de productos.
¿Cómo funciona el espectrofotómetro?
Un espectrofotómetro emite luz de una fuente específica (como luz visible o ultravioleta) a través de una muestra y mide la intensidad de la luz que la atraviesa. La diferencia entre la luz incidente y la transmitida se traduce en absorbancia, que se utiliza para calcular la concentración del compuesto mediante curvas de calibración. Equipos modernos pueden operar en rangos de 190 a 1100 nm, cubriendo UV, visible e infrarrojo cercano. Las aplicaciones incluyen la determinación de la pureza de ADN/RNA (por ejemplo, A260/A280), la cinética enzimática y el análisis de fármacos en formulaciones.
¿Qué tipos de espectrofotometría existen?
Existen varios tipos, como el espectrofotómetro de doble haz (más estable) y el de haz simple, así como técnicas especializadas como la espectrofotometría de fluorescencia, que mide la emisión de luz tras la excitación. En biotecnología, se utilizan instrumentos integrados con software para análisis automatizado, compatibles con estándares ISO, GHS y USP.
Conceptos relacionados
La espectrofotometría se complementa con técnicas como HPLC, NMR, y PCR, y es clave en la validación de métodos analíticos según normas como USP, EP y BP.