Principe de la spectrophotométrie

La spectrophotométrie repose sur la loi de Beer-Lambert, qui établit une relation linéaire entre l'absorbance d'une solution et sa concentration. En mesurant l'intensité de la lumière transmise à travers un échantillon, on peut déterminer la concentration de l'analyte.

Quels types de spectrophotomètres existent ?

Les spectrophotomètres se divisent en plusieurs catégories selon la région du spectre électromagnétique utilisée :

• UV-Visible : pour les mesures entre 190 et 800 nm, couramment utilisés pour les analyses de protéines, d'acides nucléiques et de colorants.
• Infrarouge (IR) : pour l'identification des groupes fonctionnels dans les molécules organiques.
• Visible : pour les solutions colorées, souvent employés en microbiologie et en chimie analytique.

Quelles sont les applications en laboratoire et en réglementation ?

En laboratoire, la spectrophotométrie est utilisée pour :

• Quantifier des protéines (ex. : méthode de Bradford, A280).
• Mesurer la concentration d'ADN ou d'ARN (A260).
• Suivre les réactions enzymatiques en temps réel.

Dans les domaines réglementaires (USP, EP, ISO, REACH), elle sert à vérifier la pureté et la concentration des substances actives dans les médicaments, les additifs alimentaires et les produits chimiques. Les résultats doivent être documentés dans les rapports de conformité, les fiches de données de sécurité (SDS) et les certificats d'analyse (CoA).

Concepts associés

La spectrophotométrie est souvent combinée avec d'autres techniques comme la chromatographie (HPLC, GC-MS) ou la spectroscopie RMN (NMR) pour une identification plus précise des composés.