Spektrophotometrie
Spektrophotometrie ist eine analytische Methode zur Bestimmung der Konzentration von Substanzen in Lösung durch Messung der Lichtabsorption bei spezifischen Wellenlängen. Sie wird in der Biotechnologie, Chemie und Pharmazeutik für Qualitätskontrolle und Quantifizierung eingesetzt.
Was ist Spektrophotometrie?
Spektrophotometrie ist eine physikalisch-chemische Analysemethode, die auf der Absorption von elektromagnetischer Strahlung durch Substanzen basiert. In der Regel wird das sichtbare Licht oder das ultraviolette (UV) Licht verwendet, um die Konzentration von Molekülen wie Nucleinsäuren, Proteinen oder Farbstoffen in Lösung zu bestimmen. Die Absorption wird gemessen, indem Licht durch eine Probe geleitet wird und der Unterschied zwischen einfallendem und durchgelassenem Licht erfasst wird. Die resultierende Absorbanz ist proportional zur Konzentration der absorbierenden Substanz gemäß dem Lambert-Beer-Gesetz.
Welche Anwendungen hat die Spektrophotometrie in der Biotechnologie?
In der Biotechnologie wird Spektrophotometrie häufig zur Quantifizierung von DNA, RNA und Proteinen verwendet. Beispielsweise wird bei 260 nm die Absorption von Nucleinsäuren gemessen, bei 280 nm die von Proteinen. Durch das Verhältnis der Absorbanzen bei 260 nm und 280 nm (A260/A280) kann die Reinheit von Nukleinsäuren beurteilt werden. Zudem wird die Methode in der Enzymkinetik, bei der Bestimmung von Zellkonzentrationen (z. B. in Mikroorganismen) und in der Qualitätssicherung von Reagenzien eingesetzt.
Welche Geräte und Standards sind relevant?
Spektrophotometer sind die zentralen Geräte, die UV- und sichtbares Licht abstrahlen und die Transmission messen. Moderne Geräte sind oft mit Software zur Datenanalyse ausgestattet und können mit Standards wie ISO 17025, USP, EP oder BP kalibriert werden. Die Verwendung von Kontrollproben, blanken Lösungen und standardisierten Prozeduren gemäß GHS oder SDS ist entscheidend für reproduzierbare Ergebnisse.
Verwandte Konzepte
Spektrophotometrie ist eng mit Techniken wie HPLC, NMR, UV-Vis-Spektroskopie und ELISA verbunden. Sie bildet die Grundlage für viele quantitative Analysen in der Forschung und der industriellen Produktion.