Electroforesis en gel
Técnica analítica que separa moléculas cargadas, como ácidos nucleicos o proteínas, según su tamaño y carga mediante su migración en un medio gelificado bajo un campo eléctrico.
¿Qué es la electroforesis en gel?
La electroforesis en gel es una técnica fundamental en biología molecular y bioquímica utilizada para separar moléculas biológicas como ADN, ARN o proteínas según su tamaño, carga eléctrica y forma. Se realiza en un gel, generalmente de agarosa para ácidos nucleicos o de poliacrilamida para proteínas, que actúa como una matriz de filtrado. Cuando se aplica un campo eléctrico, las moléculas cargadas se mueven a través del gel hacia el electrodo de carga opuesta. Las moléculas más pequeñas se desplazan más rápido, permitiendo su separación por tamaño.
¿Cómo se utiliza en laboratorios de investigación y control de calidad?
En laboratorios de investigación, la electroforesis en gel se emplea para verificar la pureza de muestras, confirmar la presencia de fragmentos de ADN, analizar expresión génica o caracterizar proteínas. En control de calidad de productos biotecnológicos, se utiliza para validar la integridad de productos como anticuerpos o enzimas, asegurando que no haya contaminación o degradación. Técnicas derivadas como la electroforesis en gel de SDS-PAGE permiten separar proteínas por masa molecular, mientras que el análisis de ADN en geles de agarosa es esencial en clonación y secuenciación.
¿Qué factores influyen en la resolución de la separación?
La resolución depende de varios factores: la concentración del gel (mayor concentración para moléculas más pequeñas), el voltaje aplicado (demasiado alto puede causar calentamiento y distorsión), el tipo de buffer (como Tris-HCl o PBS), y el tiempo de corrida. Además, el uso de marcadores de peso molecular (como marcadores de ADN o proteínas) permite estimar el tamaño de las bandas. La técnica se complementa con técnicas de detección como tinción con bromuro de etidio (para ADN) o Coomassie Blue (para proteínas), o con métodos inmunológicos como la Western blot.
Conceptos relacionados
La electroforesis en gel está estrechamente relacionada con técnicas como la electroforesis capilar, la electroforesis en gel de agarosa, la SDS-PAGE, y el análisis por PCR seguido de electroforesis. Su uso es esencial en la investigación genética, el desarrollo de fármacos y el cumplimiento de normas reguladoras como ISO, USP, EP y GHS.