Elettroforesi su gel

Come funziona l'elettroforesi su gel?

L'elettroforesi su gel si basa sul principio che le molecole cariche si muovono in un campo elettrico. Quando un campione contenente DNA, RNA o proteine viene caricato su un gel (solitamente di agarosio per acidi nucleici o di poliacrilamide per proteine), un campo elettrico applicato provoca il movimento delle molecole verso l'elettrodo con carica opposta. La velocità di migrazione dipende dalla dimensione della molecola, dalla sua carica e dalla porosità del gel. Le molecole più piccole si muovono più velocemente e si spostano più lontano rispetto a quelle più grandi.

Quali tipi di gel vengono utilizzati?

Per il DNA e l'RNA si utilizza principalmente gel di agarosio, che è più poroso e adatto a separare frammenti di grandi dimensioni. Per le proteine si impiega il gel di poliacrilamide, che offre una risoluzione più alta e permette di distinguere tra proteine di massa molecolare simile. Il gel può essere visualizzato dopo l'elettroforesi tramite staining con coloranti come il bromuro di etidio (per DNA) o il blu di Coomassie (per proteine), oppure con tecniche più sensibili come la chemiluminescenza.

Quali sono le applicazioni in ricerca e regolamentazione?

L'elettroforesi su gel è fondamentale in biologia molecolare, genetica, biotecnologia e controllo qualità. Viene utilizzata per verificare l'integrità del DNA, confermare l'identità di un campione, analizzare l'espressione genica, controllare la purezza delle proteine e validare i risultati di tecniche come la PCR o l'immunoblotting. È anche richiesta da standard regolatori come USP, EP, ISO e GHS per la caratterizzazione di prodotti biotecnologici.

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La tecnica è spesso combinata con altre metodologie come la Western blotting, la Southern blotting, la Northern blotting e l'analisi HPLC per un'identificazione e caratterizzazione completa delle biomolecole.