Inmunoensayo de Western

¿Qué es el inmunoensayo de Western?

El inmunoensayo de Western, también conocido como transferencia inmunoblot, es una técnica fundamental en biología molecular y bioquímica para identificar y cuantificar proteínas específicas en una mezcla compleja. Este método combina la separación de proteínas por tamaño mediante electroforesis en gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) con la detección específica mediante anticuerpos conjugados a enzimas o fluoróforos.

¿Cómo funciona el inmunoensayo de Western?

El proceso comienza con la lisis celular para extraer proteínas, seguida de su separación por tamaño en un gel de poliacrilamida bajo condiciones denaturantes (SDS-PAGE). Las proteínas se transfieren luego a una membrana de nitrocelulosa o PVDF, donde se bloquean sitios no específicos para reducir el fondo de señal. A continuación, se incuban con un anticuerpo primario específico contra la proteína de interés, seguido de un anticuerpo secundario conjugado a una enzima (como peroxidasa) o un fluoróforo. La detección se realiza mediante quimioluminiscencia, colorimetría o fluorescencia, permitiendo visualizar bandas correspondientes a la proteína objetivo.

¿Para qué se utiliza el inmunoensayo de Western?

Es ampliamente empleado en investigación biomédica para estudiar expresión génica, modificaciones post-traduccionales (como fosforilación), interacciones proteína-proteína y validación de resultados de técnicas como PCR o microarreglos. También tiene aplicaciones en diagnóstico clínico, control de calidad de productos biotecnológicos y desarrollo de fármacos.

Conceptos relacionados

Técnicas complementarias incluyen el inmunoensayo de ELISA, la electroforesis en gel (SDS-PAGE), la inmunohistoquímica y el análisis por espectrometría de masas (LC-MS/MS). Los reactivos clave incluyen anticuerpos monoclonales y policlonales, buffers como Tris, PBS y HEPES, y agentes de bloqueo como leche desnatada o BSA.