HPLC

Qu'est-ce que la HPLC ?

La chromatographie liquide à haute performance (HPLC) est une méthode de séparation basée sur la différence d'affinité des composés entre une phase stationnaire solide ou liquide et une phase mobile liquide. Grâce à sa haute résolution et sa sensibilité, la HPLC permet d'analyser des échantillons complexes avec une grande précision, même à des concentrations très faibles.

Comment fonctionne la HPLC ?

Dans un système HPLC, le mélange d'échantillons est poussé à travers une colonne remplie d'un matériau stationnaire à l'aide d'une pompe à haute pression. Les composés s'interagissent différemment avec la phase stationnaire, ce qui entraîne des temps de rétention variés. Un détecteur (comme un détecteur à absorption UV ou un spectromètre de masse) mesure les composés à leur sortie de la colonne, produisant un chromatogramme. Les données sont ensuite analysées pour identifier et quantifier les substances présentes.

Quels sont les principes d'application en réglementation et qualité ?

La HPLC est un outil clé dans les processus de validation de méthodes (comme définis par l'ICH Q2(R1)), le contrôle qualité des API (substances actives pharmaceutiques), des produits biologiques et des excipients. Elle est également utilisée pour surveiller la dégradation des produits, garantir la conformité aux normes USP, EP, BP et ISO, et répondre aux exigences REACH, TSCA et GHS.

Concepts associés

La HPLC est souvent couplée à d'autres techniques comme la LC-MS (chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse) pour une identification plus précise. Elle est également utilisée en tandem avec des méthodes de préparation d'échantillons comme la filtration, la lyophilisation ou la purification par affinité.