HPLC

L'HPLC (High-Performance Liquid Chromatography), nota anche come cromatografia liquida ad alta prestazione, è una tecnica analitica fondamentale per la separazione di composti chimici in soluzione. Utilizza una fase stazionaria solida o liquida e una fase mobile liquida sotto pressione elevata per ottenere separazioni rapide ed efficienti. È particolarmente utile per analizzare composti termolabili, polimeri, proteine e farmaci, garantendo alta risoluzione e ripetibilità.

Come funziona l'HPLC?

Il campione viene iniettato in un sistema in cui la fase mobile, spinta da una pompa ad alta pressione, attraversa una colonna contenente una fase stazionaria. I diversi componenti della miscela interagiscono in modo differente con la fase stazionaria, causando tempi di ritenzione variabili. Un rivelatore (come UV-Vis, fluorescenza o spettrometro di massa) misura i componenti man mano che escono dalla colonna, generando un cromatogramma. L'analisi del cromatogramma permette di identificare e quantificare i singoli composti.

Quali sono i principali tipi di HPLC?

Le principali modalità includono la cromatografia a scambio ionico (IEC), la cromatografia a fase inversa (RP-HPLC), la cromatografia a permeazione gel (GPC) e la cromatografia a affinità. Ogni tipo è ottimizzato per specifiche classi di composti, ad esempio RP-HPLC per molecole idrofobiche, mentre IEC è ideale per proteine cariche.

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L'HPLC è spesso combinata con tecniche come MS (spettrometria di massa) per un'identificazione precisa. È regolamentata da standard internazionali come USP, EP, BP e ISO, e utilizzata in conformità con GHS, REACH e TSCA per la sicurezza e la qualità dei prodotti.