DTT (dithiothreitol)
Le DTT est un réducteur couramment utilisé en biochimie pour maintenir les protéines dans un état réduit, prévenant la formation de ponts disulfure indésirables. Il est particulièrement utile dans les protocoles de purification et de séquençage des protéines.
Qu'est-ce que le DTT ?
Le DTT (dithiothreitol) est un agent réducteur organique utilisé pour stabiliser les protéines en empêchant la formation de ponts disulfure intramoléculaires ou intermoléculaires. Il joue un rôle clé dans les protocoles de purification, de séquençage et de dénaturation des protéines, notamment dans les conditions où la réduction des cystéines est nécessaire.
Pourquoi utiliser le DTT en laboratoire ?
Le DTT est préféré à d'autres réducteurs comme le β-mercaptoéthanol en raison de sa stabilité, de son efficacité à pH neutre et de sa capacité à réduire les ponts disulfure plus rapidement. Il est souvent ajouté aux tampons de lysis ou de stockage des protéines pour préserver leur conformation native. Son efficacité est maximale à pH supérieur à 7, mais il se dégrade rapidement à pH acide. Il est également utilisé dans les expériences de PCR et d'immunoanalyse pour maintenir les protéines en état réduit.
Comment manipuler le DTT en toute sécurité ?
Le DTT est sensible à l'oxydation par l'air, donc il doit être stocké à l'abri de l'air et de la lumière, généralement sous forme de solution fraîchement préparée. Il est classé comme substance chimique sensible, et son utilisation doit respecter les normes de sécurité (SDS, GHS). Les concentrations typiques varient de 1 à 10 mM selon l'application. Il est compatible avec la plupart des protocoles de biotechnologie et de pharmacologie.
Concepts associés
Le DTT est souvent utilisé en complément d'autres agents réducteurs comme le TCEP (tris(2-carboxyéthyl)phosphine), qui est plus stable mais plus coûteux. Il est également lié à des protocoles impliquant des analyses par HPLC, NMR ou SDS-PAGE.