SDS-PAGE
SDS-PAGE ist eine elektrophoretische Technik zur Trennung von Proteinen nach ihrer Molekülgröße unter Verwendung von Natriumdodecylsulfat (SDS), das die Proteine denaturiert und eine negative Ladung verleiht.
Was ist SDS-PAGE?
SDS-PAGE (Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis) ist eine Standardmethode in der Biochemie und Molekularbiologie zur Trennung von Proteinen nach ihrer Molekülgröße. Dabei werden Proteine mit Natriumdodecylsulfat (SDS) behandelt, das ihre Struktur denaturiert und ihnen eine gleichmäßige negative Ladung verleiht. Dadurch wird die Trennung ausschließlich nach Größe, nicht nach Ladung oder Form, ermöglicht.
Wie funktioniert SDS-PAGE?
In einem Polyacrylamidgel werden die SDS-behandelten Proteine unter elektrischem Feld durch das Gel migriert. Kleinere Proteine bewegen sich schneller durch das Gelmatrix als größere. Nach der Elektrophorese können die Proteine durch Färbeverfahren wie Coomassie Brilliant Blue oder Silver Staining sichtbar gemacht werden. Die Position der Banden im Gel entspricht der Molekülgröße, die durch Vergleich mit einem Protein-Markierungsstandard (Marker) bestimmt wird.
Welche Anwendungen hat SDS-PAGE?
SDS-PAGE wird häufig zur Qualitätskontrolle von Proteinen, zur Analyse von Proteinextrakten, zur Bestimmung der Reinheit von Proteinen und zur Überprüfung der Expression von rekombinanten Proteinen verwendet. Es ist auch Grundlage für Techniken wie Western Blotting und Massenspektrometrie.
Verwandte Konzepte
SDS-PAGE ist eng mit anderen Analysemethoden wie Western Blotting, Massenspektrometrie (MS), HPLC und NMR verbunden. Die Verwendung von CoA (Certificate of Analysis), SDS (Sicherheitsdatenblatt), und geeigneten Puffer wie Tris oder HEPES ist entscheidend für reproduzierbare Ergebnisse.