Cos'è l'ELISA?

L'ELISA, acronimo di Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, è una tecnica immunoanalitica fondamentale per la rilevazione e quantificazione di molecole biologiche come antigeni, anticorpi, proteine e ormoni in campioni complessi, come siero, plasma o fluidi corporei. Il metodo si basa sull'uso di anticorpi specifici legati a enzimi che, in presenza del target, generano un segnale colorimetrico, fluorimetrico o chemiluminescente misurabile con strumenti come spettrofotometri o lettori microplate.

Come funziona l'ELISA?

Il protocollo standard prevede l'immobilizzazione di un antigene o un anticorpo su una superficie solida (solitamente una placca microtitolazione), seguito dall'aggiunta del campione e di anticorpi secondari coniugati a enzimi (come perossidasi di rafano o alcalina fosfatasi). Dopo un'incubazione e un lavaggio, si aggiunge un substrato enzimatico che produce un segnale misurabile. La intensità del segnale è proporzionale alla concentrazione del target nel campione.

Quali sono i tipi di ELISA?

Esistono diversi tipi: ELISA diretto, indiretto, sandwich e competizione. Ogni tipo è ottimizzato per specifiche applicazioni: ad esempio, l'ELISA sandwich è ideale per la quantificazione di proteine in concentrazioni basse, mentre l'ELISA competitivo è utile per antigeni piccoli o in concentrazioni molto basse.

Relazioni con altre tecniche

L'ELISA è spesso utilizzata in combinazione con altre tecniche analitiche come HPLC, GC-MS, NMR o PCR per confermare risultati. È anche integrata nei protocolli di validazione di prodotti biotecnologici, conformemente a standard ISO, GHS, REACH e normative farmaceutiche come USP, EP e BP.