Absorbance
L'absorbance est une mesure de la quantité de lumière absorbée par une substance à une longueur d'onde donnée, utilisée pour quantifier la concentration de composés dans une solution en spectrophotométrie.
Qu'est-ce que l'absorbance en chimie et en biotechnologie ?
L'absorbance, notée A, est une grandeur sans dimension qui quantifie la quantité de lumière incidente absorbée par une solution à une longueur d'onde spécifique. Elle est fondamentalement liée à la loi de Beer-Lambert, qui stipule que l'absorbance est proportionnelle à la concentration du soluté et à l'épaisseur du chemin optique. Cette relation est exprimée par la formule : A = ε × c × l, où ε est le coefficient d’absorption molaire (en L·mol⁻¹·cm⁻¹), c la concentration (en mol·L⁻¹), et l l’épaisseur du cuvet (en cm).
L'absorbance est mesurée à l’aide d’un spectrophotomètre, un instrument essentiel dans les laboratoires de recherche, de contrôle qualité et de développement de produits pharmaceutiques. Elle permet de déterminer la concentration de protéines, d’acides nucléiques, de métabolites ou de composés chimiques dans des échantillons biologiques ou synthétiques.
Comment l'absorbance est-elle utilisée dans les procédés de contrôle qualité ?
Dans les chaînes de production biotechnologique ou pharmaceutique, l'absorbance est un outil clé pour le contrôle qualité (QC) en temps réel. Par exemple, elle est utilisée pour surveiller la concentration de protéines pendant les étapes de purification (comme l’affinité ou la chromatographie), ou pour évaluer la pureté d’un échantillon en comparant les absorbances à 260 nm (ADN/ARN) et 280 nm (protéines). Un rapport A260/A280 typique de 1,8 à 2,0 indique une bonne pureté de l’ADN.
Elle est également intégrée dans les protocoles de validation des procédés (PPQ) et dans les rapports de conformité réglementaire (ISO, USP, EP, GHS).
Quels sont les limites de la mesure d'absorbance ?
L'absorbance présente certaines limitations : elle suppose une solution homogène, une absence de diffusion de la lumière, et une absence d’interférences par d'autres composés absorbants. De plus, elle n’est pas adaptée aux concentrations très élevées (au-delà de 1,0 unité d’absorbance), où la loi de Beer-Lambert devient non linéaire. Dans ces cas, des dilutions sont nécessaires.
Related concepts
Absorbance, spectrophotométrie, loi de Beer-Lambert, concentration, cuvette, longueur d’onde, A260/A280, spectre d’absorption, calibration, étalonnage.