Formammide
La formammide (metanammide, HCONH2, CAS 75-12-7) è l'ammide più semplice. È un liquido incolore, igroscopico e miscibile con l'acqua. In laboratorio si usa soprattutto come agente denaturante degli acidi nucleici: abbassa la temperatura di fusione del DNA e dell'RNA nelle ibridazioni e nei tamponi di caricamento per elettroforesi. È classificata tossica per la riproduzione secondo il GHS e va quindi maneggiata con le dovute precauzioni.
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Formammide
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A cosa serve la formammide in biologia molecolare?
La formammide destabilizza i legami a idrogeno tra le basi complementari. Per questo riduce la temperatura di fusione (Tm) degli ibridi di acidi nucleici, di circa 0,6–0,7 °C per ogni 1% in volume. Le ibridazioni (Southern, Northern, FISH, in situ) possono così avvenire a temperature più basse e mantenere un'elevata stringenza. È inoltre un componente dei tamponi di caricamento denaturanti per gel di poliacrilammide e agarosio e dei campioni per l'elettroforesi capillare usata nel sequenziamento e nell'analisi di frammenti.
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Quali gradi di qualità esistono e come si valutano?
In commercio si trovano gradi ACS, gradi per biologia molecolare (privi di nucleasi) e gradi deionizzati. A contatto con l'umidità la formammide si idrolizza lentamente in acido formico e ammoniaca. La formazione di specie ioniche aumenta la conducibilità e può degradare gli acidi nucleici. Per questo il CoA riporta in genere la purezza (spesso determinata per GC), il contenuto d'acqua e la conducibilità. Per applicazioni sensibili si consiglia di acquistare prodotto deionizzato oppure di trattarlo con resine a letto misto, e di conservarlo in aliquote al riparo dall'aria.
Quali sono gli aspetti regolatori e di sicurezza?
Secondo il GHS/CLP la formammide è classificata come tossica per la riproduzione, categoria 1B (H360D: può nuocere al feto). Nell'UE è inclusa nella Candidate List delle sostanze estremamente preoccupanti (SVHC) ai sensi del REACH, il che comporta specifici obblighi di comunicazione lungo la catena di fornitura. La manipolazione richiede cappa chimica, guanti adeguati e la consultazione della SDS. Dove possibile, molti laboratori valutano alternative meno pericolose.
Concetti correlati
Denaturazione degli acidi nucleici, temperatura di fusione (Tm), ibridazione e stringenza, urea, dimetilsolfossido (DMSO), tampone SSC, elettroforesi denaturante, SDS-PAGE, sostanze SVHC.
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